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划痕实验(细胞迁移)的实验流程及经验分享

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细胞迁移(Cell migration):因其类似体外伤口愈合过程,又名伤口愈合实验(Wound healing assay),是指细胞在接收到迁移信号或感受到某些物质的梯度后而产生的移动。可用于可以观察药物、基因等外源因素对细胞迁移、修复和相互作用的影响。
基本原理:在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域,称为“划痕/伤口”,划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕/伤口”愈合,于细胞迁移过程中在开始和定期捕获图像,通过测量不同时间点的划痕间距并计算差值,可对细胞的迁移能力做出判断。
实验前准备:
1.学习:了解实验的目的、实验所用试剂耗材、实验基本操作和注意事项、结果分析等。
2.耗材:六孔板、马克笔、直尺、200ul枪头、PBS、完全培养基等。
3.规划:根据所用细胞生长速度和所需定点拍照时间提前规划实验。建议在做实验之前进行一次预实验。
实验步骤:
1.划线:于六孔板底面,马克笔顺直尺画三条横线作为标记线。
2.种板:根据分组种板,细胞密度为5x105个/孔左右。并务必铺匀。
3.划痕:待细胞长满后,用直尺比着,200ul枪头垂直于孔板和画的标记线划两条垂线,使划痕与标记线相交,可以形成若干交叉点,作为固定的检测点。
4.清洗:弃去旧培养基,用PBS轻轻润洗两到三次,直到划下来的细胞冲洗干净。
5.加液:根据分组分别加入加药培养基或无血清培养基。
6.拍照观察:划痕、清洗、加液完成后,用显微镜拍不同倍数的照片,作为0h对照。放入37℃,5%CO2培养箱中培养。在所需时间点取出细胞,于显微镜下观察同一位置划痕宽度并拍照。
7.数据分析:一种是统计细胞迁移的距离,一种是统计划痕面积。都可以用ImageJ软件来进行分析。
注意事项或经验分享:
1.直尺和马克笔等工具用前务必照紫外消杀。
2.种板所用细胞数目可根据细胞的生长快慢调整接种数量。保证每组细胞铺板密度一致,保证每孔务必铺匀。
3.提前用马克笔画好线,避免细胞种板后不好操作。枪头画线之前,不要弃去原培养基,否则划下来的细胞团块会堆积在划痕边缘上堆积导致宽度不统一。


IP属地:河北1楼2024-01-12 16:01回复