TRIZOL是一种总RNA抽提试剂，TRIZOL在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性，是最常见的RNA提取方法之一。
2、实验试剂及原理：
（1）TRIZOL含有苯酚、异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞并抑制细胞释放出的核酸酶。TRIZOL的主要成分是苯酚。TRIZOL在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性，因此常用于对纯化RNA及标准化RNA的生产。
（2）氯仿：其作为有机溶剂可以快速破坏细胞、使内容物释放、去除匀浆中的脂溶性杂质；可以抑制RNA酶的活性，并使蛋白质变性，易于通过离心去除。
（3）异丙醇：用于增加RNA局部密度，作为RNA的沉淀剂。
75%乙醇：有机溶剂，无脱水作用且挥发性好、通过相似相溶的原理达到洗涤RNA沉淀的作用。
（4）DEPC水：不含杂质和RNA酶，作为RNA溶解的溶剂。
3、耗材要求：
操作所用的EP管、枪头等应选用无酶产品。
4、实验步骤：
（1）提取细胞样本：在倒置荧光显微镜下观察细胞，选取镜下生长状态良好且贴壁细胞密集分布的细胞培养瓶；使用PBS缓冲液冲洗细胞2次。再加入1.5ml PBS缓冲液润洗，并使用细胞刮刀轻轻刮下贴壁细胞。使用移液器转移至1.5ml 无酶EP管。放入离心机常温，1500rpm，离心五分钟。吸去上清液，加入1ml TRIZOL吹匀，冰上静置至充分裂解（5-10分钟即可）。
对于在6孔板、24孔板等细胞数量少的容器中培养的贴壁细胞可以先用PBS洗涤后，TRIzol可直接加入孔中，待充分裂解后，再移入EP管，进行后续操作。
组织样本：则选取新鲜的或-80℃冰箱和在液氮中冻存的组织。用干净的剪刀镊子剪取50mg左右组织充分剪碎，加入1ml TRIZOL，使剪碎组织要充分接触裂解液，组织匀浆7000rpm，15s、3次；室温放置五分钟；再最大离心速度瞬离，转移上清液至EP管中。
（2）加 200μl氯仿，上下颠倒混匀至冰沙状，冰上静置5 min。使用低温高速离心机12000 rpm,4 ℃， 离心15 min。
离心后的EP管分成三层，用移液枪吸取最上层上清400-500μl移到另一个新的EP管中。
若三层分层不清：如离心分层结果不理想、转移中发生颠簸，等应重新离心；吸取过程中枪头触及上清液以下区域应将上清液打回，重新离心。
（3）再向其加入400-500μl异丙醇（与上清液体积比为1:1），上下颠倒混匀，冰上静置至RNA充分沉淀。12000 rpm，4 ℃离心10min。
（4）弃去上清液，用加入1 ml 75% 乙醇（无水乙醇与RNase的水配制）混匀。7500rpm，4 ℃离心5 min（为提高纯度可再重复此步）。
（5）弃去上清液，冰上放置晾晒五到十分钟，用小量程移液器再次吸取残留液体。用枪头边缘刮净或用脱脂棉签EP管边缘液滴，放置至液体挥发干净（不可完全干燥，否则沉淀可能无法溶解）。
（6）加入适量DEPC溶液溶解RNA白色沉淀，使其重悬。重悬后的液体可以65℃孵育5min，轻柔混匀。
5、RNA完整性的鉴定：
（1）使用紫外分光光度计测量RNA样本的浓度。
RNA样本OD260/OD280的比值在1.8到2.2之间，OD260/OD230的比值在2以上，则样本质量良好。
通常认为：OD260/OD280的值1.8-2.2之间纯度良好；小于1.8则可能有蛋白质残留；大于2.2则可能有RNA的降解。
OD260/OD230的比值在2以上样本无污染。小于2.0则可能存在盐离子的污染。
（2）配置无酶化的电泳缓冲液及1%EB琼脂凝胶；并对电泳槽等设备进行无酶化处理。
（3）将样本加入1% EB琼脂糖凝胶中，90-110V的电压下恒压电泳。
（4）凝胶成像仪下成像，出现三条清晰的RNA电泳条带28s、18s、5s；28s条带的亮度大致为18s条带的两倍，说明RNA完整性良好。
6、RNA的保存：
提取RNA或重复使用样品时，可能会引入少量的RNase污染。正确的保存可以减少RNase污染和随之而来的样品降解。可使用DEPC水溶解RNA或用水性缓冲液溶解沉淀并存储于-80℃。常用缓冲液包括：含0.1mmol/L EDTA的DEPC水或商品化的RNA储存液，RNA在-80℃下可稳定保存1年。
当从存储状态中取出RNA时注意冰上解冻，若样本过多，注意按照需要分装，防止反复冻融对RNA的损伤与暴露于RNase的污染。