宝子们，后台收到大家的诸多留言，有想了解“胃、结直肠癌淋巴结转移模型；对乙酰氨基酚肝损伤模型；高脂模型“等等，小编均已收到，也登记在册，大家不要着急，小编会一一输出干货内容”。今天事情比较多，来不及整理以往的实验案例，今天咱们说说PCR实验中引物的话题吧~ 今天给小伙伴们分享的是PCR引物设计的8大原则，直接上干货，设计引物的时候，我们都需要考虑哪些因素呢？ PCR引物设计的目的是确保PCR反应能够有效、特异性地扩增

一、实验的数据来源于哪里？ 科研项目成功的关键是什么？合理的实验设计？严谨的实验操作？等这些都是必不可少的因素之一。但是，还有一项目是容易被忽视-样本，所有的实验的数据都来源实验样本，如果想要得到一个好的实验结果，就必须严格的把控实验样本的采集和预处理，保存。 二、常规样本的采集与保存有哪些诀窍？ 常规组学样本的采集与保存避坑攻略，总结归纳为以下“七要素”，轻轻松松就能完成样本的收集： 七要素： 一致：实

实验方案设计可是科研的关键哦！“创新性”和“可行性”是好方案的必备两点。理论很简单，但现实可复杂啦，我们会受到各种限制，面临很多挑战呢。下面是一些常见的方案设计雷区哦： 战略篇 1.不知道新热点，还在关注过时的热点，比如细胞凋亡和自噬已经 out 啦，细胞焦亡、铁死亡才是新潮流哦； 2.研究热点在小疾病方向还行，在大疾病方向就不行啦，比如以各种非编码 RNA 研究出发的 ceRNA 机制； 3.对新热点了解不深入，只会机械模仿，可能

内参，顾名思义，就是内部参照。它在 Western Blot 实验中起到了重要的作用，用于校正蛋白质样本的加载量差异和检测系统的误差。就像是一把尺子，可以让我们在比较不同样本之间的蛋白质表达时有一个基准。 那么，如何选择内参呢？一般来说，我们需要考虑以下几个因素： 1、蛋白表达丰度：内参应该在样本中稳定表达，且表达量相对较高，这样才能有效地检测到内参信号。 2、分子量：内参的分子量应该与目标蛋白的分子量有明显差异，以便在

载体 在Cohen和Boyer的实验中，两种质粒都能在E. coli中复制。因此，这两种质粒都可以作为载体，使重组DNA得以复制。所有基因克隆实验都需要这样的载体，我们称之为载体（Vector），但典型的基因克隆实验只涉及一个载体，以及一个依赖于载体进行复制的外源DNA片段。外源DNA没有复制起点，即DNA复制开始的地方，因此除非将其放入具有复制起点的载体中，否则它无法复制。自20世纪70年代中期以来，已经开发了许多载体；这些载体分为两大类：质粒（pl

抗体是一种由浆细胞（效应B细胞）分泌，被免疫系统用来鉴别与中和外来物质如细菌、病毒等的大型Y形蛋白质，仅被发现存在于脊椎动物的血液等体液中，及其B细胞的细胞膜表面。抗体能识别特定外来物的一个独特特征，该外来目标被称为抗原。 1. 做流式的抗体和免疫组化的抗体是一样的吗? 不一定能通用。流式是用直接标记还是间接标记?如果是直接标记的话，那这个抗体一般不是FITC标记或者就是TRITC，PE之类的。如果恰好你的免疫组化，也是想用

巨噬细胞极化是指巨噬细胞在不同微环境刺激下改变其表型的过程。巨噬细胞通常极化为 M1 或 M2 两种表型，分别释放促炎或抗炎因子，发挥不同的功能。M1型巨噬细胞由 Th1细胞因子（TNF-α、IFN-γ）和细菌成分（脂多糖等）诱导，活化的 M1 巨噬细胞吞噬并破坏微生物，清除肿瘤细胞，并将抗原呈现给 T 细胞以引起适应性免疫反应。M2型巨噬细胞由 Th2细胞因子（IL-4、IL-13）诱导，主要发挥抗炎和组织修复的作用，参与伤口愈合、血管生成和纤维化等过程

免疫荧光染色是实验室常用的技术之一，但在操作过程中，有许多需要注意的细节，任何一个环节的失误都可能导致实验失败。本文将为您介绍免疫荧光染色的注意事项，并附上零失误封片技巧。 1. 抗体选择：选择针对您研究的目标蛋白特异性高、亲和力强的抗体，一抗的浓度需要预实验摸索。一抗浓度过高(本身荧光实验，一抗的浓度就较高)，也是造成自发荧光强的重要原因。 2. 抗体稀释：根据抗体说明书建议，使用合适的稀释液和稀释比例进行

菌种保藏是指保持微生物菌株的活力和遗传性状的技术。微生物在使用和传代过程中容易发生污染、变异甚至死亡，因而常常造成菌种的衰退。菌种保藏的目的就是使菌株存活、不丢失、不污染杂菌、不发生或少发生变异，保持菌种原有的活性和各种特征。菌种保藏的基本原理是使微生物的生命活动处于半永jiu性的休眠状态，也就是将微生物的新陈代谢作用限制在最低范围内。 实验室常用的保菌方法有：甘油保菌法、斜面保菌法、穿刺保菌法、液体

一、原理： Cell Counting Kit-8（简称CCK-8）试剂含有WST-8，它在电子载体（1-Methoxy PMS）的作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazan dye）。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比，因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。 CCK-8法因其高灵敏度，无放射性的比色检测法的优点，可替代传统的MTT法。 二、检测步骤： 向96孔的各孔中加入100μl细胞悬液。 使用适当的培养基制备50,000-100,000个/ml的细胞悬液。 在37

在学习过程中，我们经常会遇到各种PCR字眼，什么qPCR、RT-PCR、RT-qPCR、Real-Time PCR，你了解PCR这个大家族吗？还在傻傻分不清吗？ 一、什么是PCR？ PCR是聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction）的简称，是一种体外扩增特定DNA片段的分子生物学技术。PCR技术自问世以来，在生物科学领域、分子诊断领域、亲子鉴定、法医鉴定以及犯罪调查等方面发挥了巨大作用，是迄今为止最为重要的技术之一。经过演化和革新，PCR技术已经发展了三代：普通PCR技术、实时

一张理想佳良的切片，除组织固定适当和染色清晰之外，还应具备：薄、平整，无皱褶压缩，无裂损抓迹及擦痕，同时贴片排列密集，整齐位置适当，透明度好，封片用胶适量，盖玻片端正，无气泡等。 1 影响切片质量的因素 2 石蜡切片中的异常及原因和处理方法 异常表现 原因和处理方法 切片纵裂或纵断 1、刀刃损，须磨、鐾。 2、刀口粘附细纤维，须擦净刀口。 3、组织内有细小过硬异物或骨质等。剔除异物，骨质脱钙。 切片弯曲或滚卷 1、刀钝须

液氮罐的定义 采用真空绝热保温技术制作的容器，放液氮于其中，利用液氮常压下沸点-196℃的原理，实现生物样本长时间低温保存的设备。 液氮罐的分类 根据液氮罐的不同指标，液氮罐有不同的分类。 按用途分 按用途分，可以分为液氮存储罐和液氮运输罐两种。其中液氮存储罐适合于不同容量长时间的稳定存储，罐体不能用来运输，运输存在安全隐患。液氮运输罐具有体积小和减震结构设计，适用于少量样本的转移存储和短距离运输使用。 按液

细胞铺板实验 主要分为3大步骤：收集细胞→细胞计数→细胞铺板。 一、收集细胞，制作单细胞悬液 这里需注意： 消化细胞需要选择适用的消化液、适当的消化温度和时间。建议新手或者养的是一个新细胞时，自己要观察最佳胰酶消化时间及浓度。 消化后需要轻轻拍打细胞贴壁面，震落细胞。 一般用1000rpm/min离心即可，离心力太大细胞容易抱团！ 离心后，要充分悬浮！悬浮离心后的细胞团时，先不要把所有液体都加进去！一般先加2mL液体，然后用1m

脑出血（intracerebral hemorrhage，ICH）目前占全部脑卒中发病的10%～20%，依靠目前的循证医学方法，对其有用的治疗手段较少。ICH患者于30d内死亡的可能性高达35%～52%，且有80%的患者在出血后6个月时生活仍不能自理。ICH的致死致残率很高，且目前治疗中能提升患者生存率以及提高出血后生活质量的较少。因此，构建能够模拟疾病发生发展的动物模型极为重要。 动物的选择 大鼠、小鼠、兔、猴、狗、猪。其中，SD大鼠是目前最常用的脑出血实验动物，其优

酒精性肝损伤( alcohol liver disease，ALD)是指由于饮酒而导致的肝代谢损伤的疾病。随着现阶段生活水平的提高, 酒精性肝病的发病率逐年提高。该种疾病早期表现为脂肪肝，如果不及时干预，进一步发展会成为肝炎、肝纤维化及肝硬化等严重疾病。酒精性肝损伤模型可分为急性肝损伤动物模型与慢性酒精性肝损伤模型，今天小助手为宝子们介绍其几种常见的造模方法及各自的特点。 一、急性酒精性肝损伤模型 建立急性酒精肝损伤模型一般采用大鼠或小

酒精性肝损伤( alcohol liver disease，ALD)是指由于饮酒而导致的肝代谢损伤的疾病。随着现阶段生活水平的提高, 酒精性肝病的发病率逐年提高。该种疾病早期表现为脂肪肝，如果不及时干预，进一步发展会成为肝炎、肝纤维化及肝硬化等严重疾病。酒精性肝损伤模型可分为急性肝损伤动物模型与慢性酒精性肝损伤模型，今天小助手为宝子们介绍其几种常见的造模方法及各自的特点。 一、急性酒精性肝损伤模型 建立急性酒精肝损伤模型一般采用大鼠或小

临床前生物医学实验

随着我国老龄化社会的形成，心脑血管疾患逐渐成为严重影响人们生命健康的最主要疾病。心肌缺血将导致心肌细胞不可逆性坏死，被称为心肌梗死。作为终末分化细胞，大面积心肌细胞梗死将导致严重心脏功能不全危及患者生命及时恢复缺血心肌组织的血液灌注一“再灌注”是治疗急性心肌梗死唯一有效的方法。然而，当缺血心肌再次获得血液灌注后将导致比同时间单纯缺血更加严重的心肌损害，这一矛盾的现象被称为再灌注损伤。心肌缺血再灌注

如何从症状上区分流感和新冠病毒感染？ 判断是流感、新冠病毒感染还是叠加感染，在临床症状方面直接鉴别有一定难度，流感临床症状主要有：畏寒、高热、乏力、肌肉酸痛、头痛等全身毒血症状，同时可伴有咳嗽、咽痛、流涕等呼吸道症状。总体来说，全身毒血症状重，呼吸症状相对轻。而嗅觉和味觉异常是新冠病毒感染独特的伴有症状。早期鉴别和明确诊断，需要通过同时对新型冠状病毒和流感病毒的抗原和核酸进行检测。抗原检测大家可以

1. 贴壁细胞如何进行传代? 去掉原T25培养瓶里面的培养基，T25瓶加3-4 ml PBS洗1-2次;弃PBS，再加1.5 ml的Trypsin-EDTA (1X)消化液消化细胞，显微镜下观察，待细胞变圆，细胞间隙明显，部分细胞刚开始脱离瓶壁，加4 ml左右完全培养液混匀终止消化，将细胞小心吹打下来，1000 rpm/min室温离心5min;弃上清，细胞沉淀用完全培养液重悬，按要求分瓶(视细胞密度而定1:2-1:3，1:3-1:6，1:6-1:8)，每T25瓶补足培养基至5-6 ml，37℃、5%CO2孵箱培养。 2. 悬浮性细胞应如何传代处理?

1. 无信号/荧光强度弱 信号补偿不正确 检查流式细胞仪上单色阳性对照是否设置正确，以及门控和补偿设置是否正确，确保您能捕获所有事件。 用于检测的抗体不足 增加抗体量或抗体浓度。 无法接近细胞内靶标 检查靶蛋白是否是位于细胞内，或者膜蛋白的抗体表位是否位于细胞内。关于细胞内染色，确保充分透化。为防止细胞表面蛋白质发生内化，所有操作步骤必须在冰上或 4℃ 下用预冷的交联试剂完成，以阻止所有细胞反应。 在实验试剂中添加

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急性感染后，CD8+ T细胞增殖并分化为细胞毒性T淋巴细胞(ctl)以消除感染的靶细胞。ctl的分化与转录、表观遗传和代谢重组相平行，以支持其克隆扩增和效应功能，如细胞因子分泌和细胞毒性。在病原体被清除和炎症消退后，大多数效应T细胞死亡，只有少数淋巴细胞作为长期记忆T细胞保留下来。 然而，当抗原不能被消除时，例如在持续性感染和癌症中，持续的抗原受体刺激会驱动另一种分化轨迹，即T细胞耗竭。耗竭的T (Tex)细胞在表型上表现为PD-1、Tim

非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）是一种以肝细胞脂肪堆积为特征的疾病，也是人类最常见的慢性肝脏疾病。据统计，罹患 NAFLD 的人数约占全球总人口的四分之一，而中国的患病率已超过29%，并且呈发展状态。NAFLD 的发病机制复杂，脂肪组织炎症和肠道微生物及其代谢物是关键环节；另外，与胃肠道炎症相关的饮食、环境和遗传因素在发病过程起到的作用也被逐渐重视。小编从模型动物的选择、动物模型的建立角度出发，阐述不同动物和方法的优缺点及特

在动物实验研究中，采血是动物实验中最常用的操作技术之一，经常要采集实验动物的血液进行检测分析。MDL在具体实验过程中，满足“3R”原则的同时，选择对动物的疼痛、组织损伤及压力最小的采血方法，降低实验过程中与压力相关的福利指标，如血清或血浆中的皮质酮水平、血糖值、生长激素或泌乳素、心率、血压以及行为学等，将应激降至最小程度，这既考虑到了动物福利，也获得了良好的科学数据。 一、采血位点有哪些？ 依据采血位点不

大家好，巨噬细胞和线粒体一直都是国自然申请中大家重点关注的内容，今天给大家分享一篇近期发表在《Nature Communications》杂志上的炎症巨噬细胞和线粒体DNA以及最近热度很高的“神药”二甲双胍相关的研究。 急性炎症可以通过免疫抑制缓解，也可以持续存在，导致慢性炎症。这些转变是由免疫细胞不同的分子和代谢重编程驱动的。抗糖尿病药物二甲双胍抑制急性和慢性炎症的机制尚未完全明了。 该研究报告了二甲双胍的抗炎和抑制活性氧物种的

招女性，实验志愿者，报酬高

癌痛是癌症治疗过程中严重影响患者生活质量的并发症之一。据统计，约60%~90%的晚期癌症患者曾遭受不同程度的疼痛折磨，其中约30%的患者曾遭受持续性剧烈疼痛的影响。相关研究证实，68%的化疗患者，在治疗的第一个月内发生化疗相关周围神 经病变（chemotherapy- induced peripheral neuro pathy，CIPN)，其程度及预后与单次和累积药物剂量有关。CIPN机制很复杂，从离子通道活性的改变到细胞内系统的变化，目前尚未完全阐释清楚，其主要表现为严重的疼痛发

采用链脲佐菌素(STZ)诱导致糖尿病模型+全层皮肤缺损法。先用链脲佐菌素(STZ)对胰岛素造成不同程度的破坏，使胰岛素分泌相对不足或绝对不足而建立糖尿病模型。 造模方法 SPF级Wistar大鼠高糖高脂饲料喂养1周后，禁食12h，腹腔注射STZ(60mg/kg)，3d后每天测定大鼠的血糖，采用尾部静脉血测定，7d后若大鼠的非空腹血糖大于16.7mmol/L即可认为糖尿病模型制作成功；再制作创面：大鼠麻醉后，在正中偏上的背部两侧各做一个直径2cm的圆形标记，备皮及消毒，

结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，MTB）是经典致病菌，引起肺结核和肺外感染。结核病是目前全球感染性疾病死亡的主要原因。 结核分枝杆菌复合群（Mycobacterium tuberculosis complex，MTBC） 该菌是细长、直或稍弯曲、两端圆钝的杆菌，长约1~4 μm，宽约0.3~0.6 μm，抗酸染色阳性，可致结核病。结核分枝杆菌复合群包括MTB、牛分枝杆菌、非洲分枝杆菌、卡内蒂分枝杆菌和田鼠分枝杆菌等。非结核分枝杆菌（non-tuberculous mycobacteria，NTM）是指分枝杆菌属中除

抑菌圈法是衡量杀菌防霉剂效果的一种方式，主要用于测定杀菌防霉剂对细菌、霉菌、酵母菌的抑菌作用，是定性或半定量的方法。通过杀菌防霉剂在琼脂平板上的扩散能力来初步筛选更有效的杀菌防霉剂品种。 用具和材料 霉菌培养皿，无菌吸管（或针筒），圆片滤纸（直径2cm），带玻璃珠的无菌水，带过滤漏斗的三角牌，镊子，接种针（环），熔化状态的琼脂培养基（最好保温于45℃左右水浴中），一定浓度的药剂，供试验用的菌种。 试验过程 用

细胞系和细胞株是细胞生物学中常用的两个概念，它们在研究细胞的生理、生化、遗传和分子生物学等方面起到了重要的作用。尽管两者相似，但实际上有明显的区别。 我们先来看看细胞系（cell line）的定义。细胞系是指从原始组织或细胞中通过培养和传代培养等方法获得的由同一种细胞组成的细胞群体。简单来说，细胞系是通过将原始细胞进行一系列培养和传代培养过程，使其能够持续增殖并具有某些特定的性质或表达某些特定的基因。 与细胞系

反相液相色谱方法开发色谱柱的选择一般有两种方法，一种是基于实际经验，另一种则是基于理论知识，包括固定相和分子的化学性质。今天我们来聊一聊如何基于理论知识选择合适的色谱柱。首先我们要了解目标分子中存在的官能团，以及它们是如何与固定相相互作用的。 化合物中常见基团的作用力 1. 亚甲基 在亚甲基链是CH2的情况下，存在其他官能团，那么该官能团的极性很低或几乎是非极性的。非极性分子，可以与伦敦分散力模式下的固定相相

《人工智能医疗器械注册审查指导原则》中提到，注册申报资料在符合医疗器械注册申报资料要求等文件要求基础上，满足医疗器械软件、医疗器械网络安全、移动医疗器械等相关指导原则要求，同时重点关注以下要求： 一、产品注册 1、申请表信息 （1）人工智能独立软件 产品名称应符合通用名称命名规范要求，通常体现输入数据（如CT图像、眼底照片）、目标疾病（含病变、疾病的属性）、预期用途（如辅助分诊、辅助评估、辅助检测、辅助诊断

在液相色谱分析过程中，常会出现下面9种色谱峰，你知道每种色谱峰产生的原因和解决办法吗？ 01、峰拖尾 峰拖尾原因总结如下： 1、柱筛板堵塞：色谱柱的进出口的筛板堵塞，样品进入色谱柱时会受阻，液体流动受阻形成延迟，使得样品在相中停留时间变长，从而使峰型拖尾。 阻塞原因：A、配置流动相时污染 B、型号规格插口不匹配，在扭紧的那时候造成形变而促使管道阻塞。C、试品解决液清洁得不整洁，长期性会在六通阀和柱中间产生堵塞受阻